一、2025版中国药典要求前处理及检测方法

1. 三七、浙贝母、川贝母、湖北贝母、伊贝母、平贝母、白术

       取供试品粉末（过三号筛）3g，精密称定，置 50mL 具塞离心管中，加入 1% 冰醋酸溶液 15mL，涡旋使分散均匀，放置 30 分钟，精密加入乙腈 15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（每分钟 500 次）5 分钟，置冰浴中放置 20 分钟，加入无水硫酸钠与无水乙酸钠的混合粉末（4:1）7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡 3 分钟，离心（每分钟 4000 转）5 分钟。精密量取上清液 9mL，置预先装有净化材料的分散固相萃取净化管（无水硫酸镁 900mg，N-丙基乙二胺 300mg，十八烷基硅烷键合硅胶 300mg，硅胶 100mg，石墨化碳黑 45mg）中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（每分钟 500 次）5 分钟使净化完全，离心（每分钟 4000 转）5 分钟，精密吸取上清液 5mL，用乙腈稀释至 20mL，摇匀，即得。

2. 高效液相色谱-串联质谱法

色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长 100mm，内径为 2.1mm，粒径为 1.8μm）；以 0.1% 甲酸溶液（含 5mmol/L 甲酸铵）为流动相 A，以甲醇-0.1% 甲酸溶液（含 5mmol/L 甲酸铵）（95:5）为流动相 B，按下表进行梯度洗脱；流速为每分钟 0.3mL，柱温为 40℃。

液相梯度

1. 前处理

称量：称取样品 3.0g（精确至 0.001g）置于 50mL 带螺旋盖的离心管中，加标。

提取：加入 1% 冰醋酸溶液 15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置 30 分钟，精密加入乙腈 15mL，涡旋使混匀，剧烈手摇 5 分钟，置冰浴中放置 20min。加入 4 颗玻璃均质子，后加入 Cleanert MAS-Q 提取盐包立即摇散，剧烈手摇 3 分钟，置冰浴中冷却 10 分钟， 4000r/min 离心 5 分钟，上清液作为提取液。

净化：精密吸取提取液 9mL，置于 Cleanert MAS-Q 净化包中，涡旋使充分混匀，剧烈手摇 5 分钟使净化完全，8000r/min 离心 5 分钟，取上清液 5mL，用乙腈稀释至 20mL，摇匀，过 0.22μm 尼龙（NY）滤膜，精密吸取 1mL 于棕色进样小瓶中，加入 0.3mL 水，混匀，待测定。

2. 色谱条件

色谱柱：Luna Omega Polar C18 1.6 µm，2.1 × 100 mm；
P/No：00D-4748-AN
流动相：
A：0.1% 甲酸-5mM 甲酸铵水溶液；
B：甲醇：0.1% 甲酸-5mM 甲酸铵水溶液=95:5；
流速：0.2 mL/min；
柱温：40 ℃；
进样量：3 μL；

梯度程序见下表：

3. 实验结果及结论

表1 三七基质加标部分回收率实验结果

表 2 平贝母基质加标部分回收率实验结果

表 3 浙贝母基质加标部分回收率实验结果

        本实验重现了《中国药典—2341 农药残留量测定法》中第二法高效液相色谱法-串联质谱法 三七、浙贝母、川贝母、湖北贝母、伊贝母、平贝母、白术部分，利用 Cleanert MAS-Q 分散固相萃取结合液相色谱串联质谱对三七、浙贝母、平贝母等样品进行检测。考虑到 31 种标品响应及方法本身，故三七、平贝母、浙贝母基质选择 0.020mg/kg 加标。样品经乙腈提取后，Cleanert MAS-Q 分散固相萃取净化，Luna Omega Polar C18（1.6 µm，2.1 × 100 mm）液相色谱柱进行检测，采用外标法定量。结果表明，添加水平相对回收率均在 50% ~ 140% 之间，RSD 均小于 15，能够满足检测要求。

三、方案总结