一、2025版中国药典方法

1. 前处理

快速样品处理法（QuEChERS）法：
取供试品粉末（过三号筛）3g，精密称定，置 50mL 具塞离心管中，加入 1% 冰醋酸溶液 15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置 30 分钟，精密加入乙腈 15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡（每分钟 500 次）5 分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末（4:1）7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡（每分钟 500 次）3 分钟，置冰浴中冷却 10 分钟，离心（每分钟 4000 转）5 分钟，作为提取溶液。精密取提取溶液 9mL，置预先装有净化材料的分散固相萃取净化管（无水硫酸镁 900mg，N-丙基乙二胺 300mg，十八烷基硅烷键合硅胶 300mg，硅胶 300mg，石墨化碳黑 90mg）中，涡旋使充分混匀，置振荡器上剧烈振荡（每分钟 500 次）5 分钟使净化完全，离心（每分钟 4000 转）5 分钟，取上清液，即得。
固相萃取法
固相萃取净化方式包括以下三种：
方式一：精密量取直接提取法制备的供试品溶液或 QuEChERS 法提取溶液 3~5 mL，置于装有分散型净化材料的净化管 [无水硫酸镁 1200 mg，N-丙基乙二胺 300 mg，十八烷基硅烷键合硅胶 100 mg] 中，涡旋使充分混匀，再置震荡器上剧烈震荡（每分钟 500 次）5 分钟使净化完全，离心，取上清液，即得。
方式二：精密量取直接提取法制备的供试品溶液或 QuEChERS 法提取溶液 3~5 mL，通过亲水亲油平衡材料（HLB SPE）固相萃取柱（200 mg，6 mL）净化，收集全部净化液，混匀，即得。
方式三：精密量取直接提取法制备的供试品溶液或 QuEChERS 法提取溶液 2 mL，加在装有石墨化碳黑氨基复合固相萃取小柱（500 mg，6 mL）（500 mg/500 mg，6 mL）[临用前用乙腈-甲苯混合溶液（3:1）10 mL 预洗]，用乙腈-甲苯混合溶液（3:1）20 mL 洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至近干，用乙腈转移并稀释至 2.0 mL，混匀，即得。

2. 检测

高效液相色谱-串联质谱法

色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为 100 mm，内径为 2.1 mm，粒径为 1.8 μm）；以 0.1% 甲酸溶液（含 5 mmol/L 甲酸铵）为流动相 A，以甲醇 - 0.1% 甲酸溶液（含 5 mmol/L 甲酸铵）（95:5）为流动相 B，按下表 2 进行梯度洗脱；流速为每分钟 0.3 mL，柱温为 40℃。

液相梯度

依据中国药典 2341 标准要求细节，实验室选取薄荷叶、天麻、丹参样品进行分析，部分结果如下：

1. QuECHERS 法前处理步骤

称量：称取薄荷叶样品 3.0 g（精确至 0.001 g）置于 50 mL 带螺旋盖的离心管中，加标；
提取：加入 1% 冰醋酸溶液15 mL，涡旋使药粉充分浸润，放置 30 分钟，精密加入乙腈 15 mL，涡旋使混匀，剧烈手摇 5 分钟，加入 4 颗玻璃均质子，后加入 Cleanert MAS-Q 提取盐包立即摇散，剧烈手摇 3 分钟， 置冰浴中冷却 10 分钟， 4000 r/min 离心 5 分钟，上清液作为提取液；
净化：精密吸取提取液 9 mL，置于 Cleanert MAS-Q 净化包中，涡旋使充分混匀，剧烈手摇 5 分钟使净化完全，8000 r/min 离心 5 分钟，取上清液过 0.22 μm 尼龙（NY）滤膜于棕色进样小瓶中，待测定。
1.2  QuECHERS 法前处理-色谱条件

色谱柱：Luna Omega Polar C18  1.6 µm，2.1 × 100 mm；P/No：00D-4748-AN
流动相：
A：0.1% 甲酸-5 mM 甲酸铵水溶液；
B：甲醇：0.1% 甲酸-5 mM 甲酸铵水溶液=95:5；
流速：0.2 mL/min；
柱温：40 ℃；
进样量：3 μL；
梯度程序见下表：

1.3. QuECHERS 法部分回收结果

薄荷叶基质加标部分回收率实验结果

2. 固相萃取第三法前处理步骤

称量：称取天麻样品 3.0 g（精确至 0.001 g）置于 50 mL 带螺旋盖的离心管中，加标；
提取：加入 1% 冰醋酸溶液 15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置 30 分钟，精密加入乙腈 15 mL，涡旋使混匀，剧烈手摇 5 分钟，加入 4 颗玻璃均质子，后加入 Cleanert MAS-Q 提取盐包立即摇散，剧烈手摇 3 分钟， 置冰浴中冷却 10 分钟，4000 r/min 离心 5 分钟，上清液作为提取液；
活化：Cleanert PestiCarb/NH2 小柱用 10mL 洗脱液活化；
上样：精密吸取提取液 2 mL 小柱上样，接流出；
洗脱：20 mL 洗脱液洗脱小柱，抽干小柱；
浓缩：40℃ 氮气吹至 0.5 mL~1 mL，每次加入 5 mL 乙腈进行溶剂置换，置换两次后，氮气吹至 0.1 mL。用乙腈定容至 2.0 mL ，过 0.22 μm 尼龙（NY）滤膜于棕色进样小瓶中，待测定。
2.1 固相萃取第三法前处理-色谱条件同 QuECHERS 法。

2.2 固相萃取第三法前处理部分回收结果

天麻基质加标部分回收率实验结果

三、方案总结

备注：

在固相萃取第三法前处理中，实验人员发现最后上机液中如果加 0.3 mL 水上机结果会整体偏高，并且对溶剂效应没有特别大的改善，所以实验选择净化后过滤膜直接上机。

氮吹对农药回收率影响较大。所以选择基质标同氮吹来消除氮吹的干扰。同样在氮吹过程中不能吹干，由于洗脱液中含有甲苯对质谱不友好，选择通过溶剂置换的方法来解决洗脱液中甲苯的问题。
更重要的是，实验中甲磺隆、氯磺隆、胺苯磺隆等三种磺隆类农药回收率较差，推测《中国药典2341 农药残留量测定法》中第二法高效液相色谱法-串联质谱法 固相萃取法方式三不适合做磺隆类农药，因此磺隆类药物建议用固相萃取法前两种方式。