河北来复医药科技有限公司
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美托洛尔、氧烯洛尔和普萘洛尔属于β受体阻断药（英：Beta blockers）（又称β受体阻断剂），其是一类用来治疗心律不齐、防止心脏病发作后的二次心脏病发作（二级预防）和在某些情况下用来治疗高血压的药物。β受体阻断药非竞争性阻断交感神经系统中内源性儿茶酚胺肾上腺素和去甲肾上腺素的作用，尤其是肾上腺素能β受体。有些药物阻断所有β-肾上腺素能受体，有些则为竞争性阻断。
材料与方法
美托洛尔（Metoprolol)，分子式C15H25NO3 ，分子量267.36，CAS : 37350-58-6，pKa 9.5，Kow 1.8。其结构式见图1。
氧烯洛尔(Oxprenolol)，分子式C15H23NO3 ，分子量265.35，CAS : 6452-71-7，pKa 9.5，Kow 2.2。其结构式见图2。
普萘洛尔(Propranolol)，分子式C16H21NO2 ，分子量259.34，CAS : 525-66-6，pKa 9.5，Kow 3.48。其结构式见图3。
本实验使用Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板对血浆样品中的美托洛尔、氧烯洛尔和普萘洛尔进行检测。Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板(Cat: PE00501-MW, Spec: 5 mg, 1mL/well, 2 plates)，Cleanert® M96 生物样品前处理仪，1mL 96孔接收板，Venusil MP C18 ( 2.1x150mm，5μm，100Å )，以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品；
LC/MS/MS, API 4000+液相色谱-串联质谱仪（AB SCIEX）。
HPLC条件
色谱柱：Venusil MP C18 ( 2.1x150mm, 5μm, 100 Å);
流速：300 μL/min；
柱温：30℃；
进样量：10 μL；
流动相：A-0.1%甲酸水溶液；B-0.1%甲酸乙腈溶液。
表1 HPLC梯度条件
|
Total Time(min) |
Flow Rate(µl/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
300 |
78 |
22 |
|
10 |
300 |
78 |
22 |
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式；
采集模式：多反应监测（MRM）；
电喷雾电压：5000V；
气帘气（curtain gas）：15；
雾化气（gas 1）：50；
辅助气（gas 2）：40；
离子源温度（TEM）：500℃
表2 串联质谱参数
|
化合物 |
保留时间 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
美托洛尔（Metoprolol) |
2.5 |
268.3 |
116.1* |
115 |
26 |
|
191.0 |
25 |
||||
|
氧烯洛尔(Oxprenolol) |
4.1 |
260.1 |
183. 1* |
100 |
24 |
|
157.1 |
29 |
||||
|
普萘洛尔(Propranolol) |
7.7 |
266.1 |
116.1* |
105 |
24 |
|
225.1 |
19 |
注：*为定量离子
标准品制备
将美托洛尔、氧烯洛尔、普萘洛尔标准品各10 mg与10 mL甲醇混合，配置含美托洛尔、氧烯洛尔、普萘洛尔1 mg/mL的混合标准品。
将1 mg/mL的混合标准品溶液每次用水稀释10倍，最终配置100 ppb和10ppb的混合标准品。
样品处理方法
样品准备：
①高浓度(50 ppb)：将100 ppb混合标准品与血浆等体积混合，配置50 ppb血浆加标样品。
②低浓度(5 ppb): 将10 ppb混合标准品与血浆等体积混合，配置5 ppb血浆加标样品。
③不加标：将水与血浆等体积混合，配置不加标的血浆样品。
固相萃取实验过程
活化：加入200 μL甲醇； 加入200 μL水；
上样：200 μL样品；
淋洗：200 μL 5%甲醇水溶液；
洗脱：50 μL含2%甲酸的乙腈和异丙醇混合溶液=4:6；用150 μL的水定容洗脱液到200 μL，混匀，待测。
结果
表3. 血浆中美托洛尔、氧烯洛尔、普萘洛尔的回收率，n=8
|
添加浓度 |
美托洛尔 平均回收率(RSD) |
氧烯洛尔 平均回收率(RSD) |
普萘洛尔 平均回收率(RSD) |
|
50 ng/mL |
108.7% (RSD=3.3%) |
103.1% (RSD=5.1%) |
106.0% (RSD=4.4%) |
|
5 ng/mL |
107.7% (RSD=4.5%) |
99.0% (RSD=4.5%) |
94.2% (RSD=8.4%) |
结论
本实验使用Cleanert® Micro Plate PEP可拆卸微孔板提取血浆中美托洛尔、氧烯洛尔和普萘洛尔，使用微量体积洗脱，洗脱液不需要氮吹浓缩复溶即可达到相同的检出限。回收率和RSD值良好，可用于相关的检测。
订货信息
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产品名称 |
规格/包装 |
订货号 |
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Cleanert Micro Plate PEP |
5 mg,1 mL/well,可拆卸, 2块 |
PE00501-MW |
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Cleanert M96 生物样品前处理仪 |
与96孔板匹配 |
SPE-M96 |
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96位接收板 |
1 mL/well，与96孔板匹配 |
96SP1036-Y |
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Venusil MP C18 |
2.1x150mm,5 μm,100 Å |
VA950502-2 |
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甲醇 |
LC-MS级, 4*2.5L |
LC230 |
|
水 |
LC-MS级，4*2.5L/箱 |
LC365 |
|
乙腈 |
LC-MS级，4*2.5L/箱 |
LC015 |
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