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普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放。该药是一种新型γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂，能阻断电压依赖性钙通道，减少神经递质的释放，临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。
普瑞巴林一般为口服用药，其生物利用率可达到或高于90%。在血浆中的血药浓度约0.04到9.5 μg/mL
材料与方法
普瑞巴林（pregabalin)，分子式C8H17NO2 ，分子量159.23，CAS : 148553-50-8，pKa 4.2和10.6。其结构式见图1。
普瑞巴林化学结构式
本实验使用96孔蛋白沉淀板对血浆样品进行净化：Cleanert 蛋白沉淀板(Cat: 96CD2025-Q, Spec: 2mL/well, Lot: 150623)，96位正压装置，96孔接收板，Venusil MP C18(2) ( 2.1x50mm，5μm，110Å )，以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品；
LC/MS/MS, API 4000+液相色谱-串联质谱仪（SCIEX）。
血浆为牛血浆。
HPLC条件
色谱柱：Venusil MP C18（2）( 2.1x50mm，5μm，110 Å);
流速：200 μL/min；
柱温：30℃；
进样量：5 μL；
流动相：A-0.1%甲酸水溶液；B-甲醇。
表1. HPLC梯度条件
|
Step |
Total Time(min) |
Flow Rate(µl/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
0 |
200 |
80 |
20 |
|
1 |
4 |
200 |
80 |
20 |
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式；
采集模式：多反应监测（MRM）；
电喷雾电压：4500V；
气帘气（curtain gas）：30；
雾化气（gas 1）：60；
辅助气（gas 2）：30；
离子源温度（TEM）：450℃
表2 串联质谱参数
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化合物 |
保留时间 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
普瑞巴林 |
1.98 min |
160.2 |
142.1(定量) |
50 |
15 |
|
125 |
50 |
19 |
|||
|
97 |
50 |
21 |
样品处理方法
蛋白沉淀
将50 μL血浆和50 μL甲醇/水（1/1）提前混合。然后向96孔板中加入500 μL甲醇，再将上面混好的血浆加到孔中，用移液器反复抽吸几次或使用漩涡混合器混合；
使用SPE-M96正压装置，调节压力，将液体收集到96孔收集板中，3分钟后停止正压装置；
向收集板中各孔中加入400 μL 0.1%甲酸水，混匀，准备检测。
结果与讨论
表3. 血浆中普瑞巴林的回收率情况
|
加标浓度 (ng/mL) |
平均回收率 (n=8) |
RSD (n=8) |
LOD (ng/mL) |
|
25 |
96.8% |
3.12% |
0.3 |
|
100 |
95.9% |
5.05% |
结论
本实验使用蛋白沉淀板对血浆中的普瑞巴林进行了快速提取检测。在25-100 ng/mL浓度下，平均回收率为96.8%和95.9%，RSD值小于5.05%，可以满足相关的检测需求。
订货信息
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产品名称 |
规格/包装 |
订货号 |
|
Cleanert 蛋白沉淀板 |
96孔板，2mL/well |
96CD2025-Q |
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Cleanert M96 生物样品前处理仪 |
与96孔板匹配 |
SPE-M96 |
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96位接收板 |
2mL/well，与96孔板匹配 |
96SP2036-2 |
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Venusil MP C18(2) |
2.1*50mm,5μm,110 Å |
VA950502-2 |
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甲醇 |
LC-MS级, 4*2.5L |
LC230 |
|
水 |
LC-MS级,4*2.5L/箱 |
LC365 |
应用编号：YB10008
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